产品货号:
SNM167
中文名称:
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶试剂盒(比色法)
英文名称:
β-N-acetyl-glucosaminidase assay kit
产品规格:
50管/24样
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒可测动物血清(浆)、组织及培养细胞、细胞培养上清等样本β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶的活力。
保存:2~8℃,有效期6个月。
0.6mmol/L对硝基酚标准应用液的配制:
3mmol/L对硝基酚标准贮备液作5倍稀释,即3mmol/L对硝基酚∶双蒸水=1∶4稀释。
底物缓冲液的配制:
底物溶解度小,配制底物溶液时,应先用适量试剂一将试剂二粉剂1支调成糊状,再边搅拌边逐渐加试剂一到30mL,混匀至完全溶解(不可加热)。配好后的底物缓冲液为过饱和溶液,如有结晶,可静置或离心后取上清进行检测。用不完的底物缓冲液4℃可保存两个月以上。
一、血清浆、尿液样本
附录I:大鼠肾皮质中NAG的测定
相关搜索:β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶试剂盒(比色法),β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,NAG,β-N-acetyl-glucosaminidase assay kit
β-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶(简称NAG)广泛存在于各种组织器官、体液、红细胞、白细胞及血小板中,是溶酶体中的一种酸性水解酶。底物在NAG作用下水解,释放出游离的对硝基酚。加入碱性溶液停止反应,并使对硝基酚显色。在400nm处测吸光度,可计算酶活力单位。
NAG为溶酶体中一种重要的酶,可作为肾损伤一个极为灵敏的指标,由休克引起急生肾功能衰竭的机体尿液中极度增高,最高可达正常情况下的1200倍。急性肾小球肾炎、肾病综合症,毒物或药物引起的肾毒性反应均可使NAG增加。肾移植后,NAG的测定可用来判断有无排斥反应。
- 操作简便:全程约20分钟,可测50例左右样本。
- 稳定性好:试剂盒2~8℃至少存放6个月。
- 再现性好:批内CV=4.6%,批间CV=7.19%。
- 回收试验:X =98%。
- 受外界影响因素小:干扰因素少,重复性强。
- 测试面广:可测动物血清(浆)、组织、尿液以及各种水产等,效果均佳。
组分 | 规格 |
试剂一:溶液 | 40mL |
试剂二:底物粉剂 | 1支 |
试剂三:终止剂 | 2×60mL |
试剂四:液体 | 6mL |
试剂五:3mmol/L对硝基酚标准贮备液 | 2mL |
保存:2~8℃,有效期6个月。
- 分光光度计/酶标仪/半自动生化分析仪(比色测定波长为400nm)
- 恒温水浴箱或气浴箱(孵育温度为37℃)
- 漩涡混匀器
- 微量移液器
0.6mmol/L对硝基酚标准应用液的配制:
3mmol/L对硝基酚标准贮备液作5倍稀释,即3mmol/L对硝基酚∶双蒸水=1∶4稀释。
底物缓冲液的配制:
底物溶解度小,配制底物溶液时,应先用适量试剂一将试剂二粉剂1支调成糊状,再边搅拌边逐渐加试剂一到30mL,混匀至完全溶解(不可加热)。配好后的底物缓冲液为过饱和溶液,如有结晶,可静置或离心后取上清进行检测。用不完的底物缓冲液4℃可保存两个月以上。
- 试剂四天冷会有结晶析出,测试前置于37℃水浴直至透亮。
- 用分光光度计测定时吸光度至0.6或酶活力至60单位呈线性,超出此范围请将样本用生理盐水稀释后重测,结果乘以稀释倍数即可。
- 尿酶浓度随尿流率而变动,因此尿酶测定要求留取24小时尿;但因留24小时尿不方便,也不准确,故用“每单位/肌酐”比值计算酶排出率,效果较好。
- 按下表加入各成分配置反应体系。
成分 空白管 标准管 测定管 对照管 双蒸水 100μL 0.6mmol/L标准应用液 100μL 样品 100μL 100μL 试剂一 500μL 500μL 底物缓冲液 500μL - 混匀,37℃准确反应15分钟。
- 按下表继续加入相应成分。
成分 空白管 标准管 测定管 对照管 试剂三 2mL 2mL 2mL 2mL 底物缓冲液 500μL 试剂四 50μL 50μL 50μL 50μL - 混匀,在400nm处,1cm光径,双蒸水调零测各管吸光度值A。
一、血清浆、尿液样本
- 单位定义:每升样品与底物在37℃作用1分钟,水解产生1μmol对硝基酚为1个酶活力单位。
- 计算公式:
NAG活力
(U/L)= A测定-A对照 ×C标准÷T×1000 A标准-A空白
C标准:标准液浓度,0.6mmol/L;
T:反应时间,15分钟。 - 计算举例:
取血清0.1mL按步骤操作检测,测得空白管吸光度为为0.003,标准管为0.436,对照管为0.148,测定管为0.432,则计算如下:NAG活力
(U/L)= 0.432-0.148 ×0.6÷15×1000=26.236U/L 0.436-0.003
附录I:大鼠肾皮质中NAG的测定
- 样本前处理
准确称取样本的重量,按重量(g):体积(mL)=1:9的比例,加入9倍体积的生理盐水,冰水浴条件下机械匀浆,制成10%匀浆,2500转/分,离心10分钟,取上清再用生理盐水稀释成1%的匀浆液待测。
注:该匀浆浓度仅为参考,客户测定时可以根据这一浓度自行摸索样本的实际所需浓度。 - 操作表
空白管 标准管 测定管 对照管 双蒸水 20μL 3mmol/L标准液 20μL 样品 20μL 20μL 试剂一 500μL 500μL 底物缓冲液 500μL 混匀,37℃准确反应15分钟。 试剂三 2mL 2mL 2mL 2mL 底物缓冲液 500μL 试剂四 50μL 50μL 50μL 50μL 混匀,在400nm处,1cm光径,双蒸水调零测各管吸光度值A。 - 单位定义:每克组织蛋白与底物在37℃作用1分钟,水解产生1μmol对硝基酚为1个酶活力单位。
- 计算公式:
组织NAG活力
(U/gprot)= A测定-A对照 ×C标准× 1000 ÷Cpr A标准-A空白 T
C标准:标准液浓度,3mmol/L
T:反应时间,15分钟。
Cpr:组织匀浆蛋白浓度,单位gprot/L(prot指的是蛋白) - 计算举例:
取1%大鼠肾脏皮质匀浆20μL按操作表进行检测,测得各管吸光度如下:空白管为0.003,标准管为0.392,对照管为0.065,测定管为0.519,用考马斯亮蓝法测得1%匀浆蛋白含量为1.241g/L,则计算如下:组织NAG活力
(U/gprot)= 0.519-0.065 ×3× 1000 ÷1.241=188.09U/gprot 0.392-0.003 15
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